3 概述
T淋巴细胞表面有多种抗原，其中簇分化（CD）抗原分类甚多，这些抗原除了标记细胞的种类和分化阶段外，同时也有一定的功能，或作为受体、黏附分子、信号传递成分等，可通过这些表面特征性抗原鉴别亚群。目前开展较多的是用抗分化抗原的单克隆抗体，如抗CD8单克隆抗体，对外周血单个核细胞进行检测，根据出现阳性率，判定亚群分布。T淋巴细胞亚群是观察机体细胞免疫水平的重要方法，对恶性肿瘤、自身免疫性疾病、免疫缺乏症、血液系统疾病的诊断、治疗及预后判断有重要价值。T细胞亚群之间有相互制约和相互辅助的作用，任何一方的增多或减少皆影响另一亚群的形成失调。
4 T8淋巴细胞亚群的医学检查
4.1 检查名称
4.2 分类
4.3 T8淋巴细胞亚群的测定原理
人T细胞表面有多种表面抗原标记，分别代表不同的细胞亚群，CD3抗原几乎存在于所有成熟T细胞上，CD4抗原存在于Ti/Th细胞上，CD8抗原存在Ts/Tc细胞上。利用杂交瘤技术得到小鼠抗人T细胞CD8分子的单克隆抗体，将这些单克隆抗体标记上荧光素（如FITC），直接与人淋巴细胞反应，或将这些单克隆抗体（第一抗体）先与细胞表面相应分子特异性结合，再用荧光素标记的兔或羊抗鼠抗体（第二抗体）和结合在T细胞膜表面的鼠单克隆抗体结合，在荧光显微镜下观察或用流式细胞计分析，即可检测出相应膜分子阳性的细胞。
4.4 试剂
（1）聚蔗糖-泛影葡胺分层液（d＝1.077±0.001）。
（2）FITC标记羊或兔抗鼠IgG（FITC-IgG F/P为1～3）。
（4）FITC标记单克隆抗体：FITC-CD3、FITC-CD4、FITC-CD8。
（5）FITC标记小鼠IgG（FITC-mIgG）。
（6）Hank液（含5%NBS及0.1%NaN3）。
（7）5ml塑料管、荧光显微镜。
4.5 操作方法
①取肝素抗凝外周血，用淋巴细胞分层液获得单个核细胞，Hank液配成（1～2）×106细胞/ml。
②取1ml细胞悬液加入5ml塑料管中，离心2000r/min，2min，弃上清。
③加FITC-CD820μl，对照管加mIgG-FITC，4℃反应30min。
④Hank液洗2次，2000r/min，2min。
②取1ml细胞悬液于5ml塑料管中，离心2000r/min，2min，弃上清。
③加抗CD8单克隆抗体100μl，对照管加抗体稀释液或正常小鼠IgG，4℃反应30min。
④Hank液洗2次，离心2000r/min，2min，弃上清。
⑤加50μl FITC-IgG，4℃反应30min。
⑥Hank液洗2次，2000r/min，2min。
4.6 正常值
20%～30%。
4.7 化验结果临床意义
（1）降低：急性移植物抗宿主病（GVH）、系统性红斑狼疮（SLE）、溶血性贫血、高免疫球蛋白E综合征（高IgE综合征）、类风湿性关节炎。
（2）升高：无丙种球蛋白血症、病毒感染、慢性移植物抗宿主病（GVH）、结核病、真菌和原虫感染。
4.8 附注
同B细胞检测。另外，由于间接免疫荧光技术所用的羊或兔抗鼠荧光抗体与部分白细胞表面发生非特异结合，以及Fc受体的非特异细胞反应和多克隆荧光抗体的结合放大效应，从而造成非特异阳性荧光细胞增多。而对FITC直标单克隆抗体来说，抗体成分、性质和结构上完全均一，只要不使蛋白质-FITC复合物上带上过多的电荷，就不会产生非特异吸附。目前国外基本上是用直接免疫荧光法，流式细胞计来分析T细胞亚群的，由于该仪器价格昂贵，国内尚未普及应用。因而对一般临床实验室来说，用免疫荧光显微镜也能开展这项工作。