1 拼音
huà zhuāng pǐn zhōng 32zhǒng jìn xiàn yòng rǎn liào chéng fēn de jiǎn cè fāng fǎ
《化妆品中32种禁限用染料成分的检测方法》由国家食品药品监督管理局于2012年1月18日国食药监保化[2012]13号发布。
2 1 适用范围
本方法规定了测定染发类化妆品中32种禁限用染料成分（见附录A）的高效液相色谱法。
本方法适用于染发类化妆品中32种禁限用染料成分的含量测定。化妆品中的染料成分以多种形式存在，如硫酸盐、盐酸盐等，当各种形式同时存在时，应以其中的一种形式表示。
3 2 方法提要
用无水乙醇+水=1+1的混合溶液提取染发类化妆品中的32中禁限用染料成分，用高效液相色谱仪进行分析，以保留时间和紫外吸收光谱定性，峰面积定量。本方法中32种禁限用染料成分的检出限、定量下限及取0.5g样品时的检出浓度及最低定量浓度见表1。
表1 32种禁限用染料成分的检出限、检出浓度、定量下限、最低定量浓度
序号 | 物质名称 | 检出限/ μg | 检出浓度/（μg/g） | 定量下限/ μg | 最低定量浓度/（μg/g） |
1 | p-苯二胺 | 1.2′10-2 | 48 | 3.5′10-2 | 140 |
2 | 6.5′10-3 | 26 | 2.0′10-2 | 80 | |
3 | 甲苯-2,5-二胺硫酸盐 | 2.0′10-2 | 80 | 6.0′10-2 | 240 |
4 | 6.5′10-3 | 26 | 2.0′10-2 | 80 | |
5 | o-苯二胺 | 8.0′10-3 | 32 | 2.5′10-2 | 100 |
6 | 2-氯-p-苯二胺硫酸盐 | 1.5′10-2 | 60 | 5.0′10-2 | 200 |
7 | 6.5′10-3 | 26 | 2.0′10-2 | 80 | |
8 | 8.0′10-3 | 32 | 2.5′10-2 | 100 | |
9 | 2-硝基-p-苯二胺 | 5.0′10-3 | 20 | 1.5′10-2 | 60 |
10 | 甲苯-3,4-二胺 | 8.0′10-3 | 32 | 2.5′10-2 | 100 |
11 | 6.5′10-3 | 26 | 2.0′10-2 | 80 | |
12 | 2-甲基雷琐辛 | 1.3′10-2 | 52 | 4.0′10-2 | 160 |
13 | 1.0′10-2 | 40 | 3.0′10-2 | 120 | |
14 | 苯基甲基吡唑啉酮 | 2.0′10-2 | 80 | 6.0′10-2 | 240 |
15 | N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺hcl | 2.0′10-2 | 80 | 6.0′10-2 | 240 |
16 | 6.5′10-3 | 26 | 2.0′10-2 | 80 | |
17 | m-苯二胺 | 8.0′10-3 | 32 | 2.5′10-2 | 100 |
18 | 8.0′10-3 | 32 | 2.5′10-2 | 100 | |
19 | 3.0′10-3 | 12 | 1.0′10-2 | 40 | |
20 | 8.0′10-3 | 32 | 2.5′10-2 | 100 | |
21 | 1.3′10-2 | 52 | 4.0′10-2 | 160 | |
22 | N,N-双（2-羟乙基）-p-苯二胺硫酸盐 | 2.5′10-2 | 100 | 7.5′10-2 | 300 |
23 | 1.0′10-2 | 40 | 3.0′10-2 | 120 | |
24 | 4-硝基-o-苯二胺 | 1.5′10-2 | 60 | 5.0′10-2 | 200 |
25 | 1.5′10-2 | 60 | 5.0′10-2 | 200 | |
26 | N,N-二乙基-p-苯二胺硫酸盐 | 2.5′10-2 | 100 | 7.5′10-2 | 300 |
27 | 6-羟基吲哚 | 3.0′10-3 | 12 | 1.0′10-2 | 40 |
28 | 4-氯雷琐辛 | 5.0′10-3 | 20 | 1.5′10-2 | 60 |
29 | 2,7-萘二酚 | 3.0′10-3 | 12 | 1.0′10-2 | 40 |
30 | N-苯基-p-苯二胺 | 2.5′10-3 | 10 | 8.0′10-3 | 32 |
31 | 1,5-萘二酚 | 5.0′10-3 | 20 | 1.5′10-2 | 60 |
32 | 3.0′10-3 | 12 | 1.0′10-2 | 40 |
4 3 试剂和材料
3.1 无水乙醇。
3.2 甲醇，色谱纯。
3.3 乙腈，色谱纯。
3.4 亚硫酸氢钠。
3.5 磷酸溶液（1+9）：吸取磷酸（ρ20=1.69g/mL）10mL，加水90mL。
3.6 磷酸盐混合溶液：称取十二水合磷酸氢二钠1.8g、磷酸二氢钾2.8g和庚烷磺酸钠（C7H15SO3Na）1.0g，用水稀释至1L，混匀，配制成含庚烷磺酸钠（1g/L）的磷酸盐缓冲液，加入磷酸溶液（3.5），调节pH至6，0.45μm微孔滤膜过滤。
3.7 染料类化合物标准储备溶液（ρ（染料成分）=10g/L）：称取染料对照品约100mg（精确至0.1mg）于10mL容量瓶中，以2g/L亚硫酸氢钠水溶液 + 无水乙醇（3.1）=1+1的混合溶液定容至10mL，配成约10g/L的单标溶液。以下几种物质在上述溶剂中的溶解性较差，分别采取如下措施：甲苯-2,5-二胺硫酸盐和2-氯-p-苯二胺硫酸盐2种物质直接用2g/L亚硫酸氢钠水溶液溶解并定容；甲苯-3,4-二胺直接用无水乙醇（3.1）定容；2-硝基-p-苯二胺和4-硝基-o-苯二胺需将称样量减至25mg，再用无水乙醇（3.1）定容，配成约2.5g/L的单标溶液。储备液保存于0℃～4℃冰箱中，最多使用2天。
5 4 仪器
4.1 高效液相色谱仪，具有二极管阵列检测器。
4.2 分析天平，感量为0.0001g。
4.3 分析天平，感量为0.001g。
4.4 精密pH计，精度0.01。
4.5 超声波清洗器。
4.6 离心机。
4.7 涡旋混合仪。
6 5 测定步骤
5.1 样品处理
称取样品约0.5g（精确至0.001g）于10mL具塞比色管中，加无水乙醇（3.1）+ 水=1+1的混合溶液至刻度，涡旋1min，冰浴超声提取15min。浑浊溶液可取适量5000rpm离心5min，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测溶液，并尽快测定。
5.2 测定
5.2.1 色谱参考条件
色谱柱：RP-AMIDEC16柱（250mm×4.6mm，5μm）或等同柱；
色谱保护柱：RP-AMIDEC16保护柱（20mm×4.0mm，5μm）或等同柱；
流动相1：乙腈（3.3）+ 磷酸盐混合溶液（3.6）=10 + 90；
流动相2：甲醇（3.2）+ 磷酸盐混合溶液（3.6）=10 + 90；
流动相3：乙腈（3.3）+ 磷酸盐混合溶液（3.6）=40 + 60；
流量：1.0mL/min；
检测波长：280nm；
柱温：25℃。
5.2.2 校准曲线的制备
参照色谱图1~色谱图3，对32种禁限用染料成分进行分组，并根据分组情况，分别移取适量染料类化合物标准储备溶液（3.7）于10mL容量瓶中，用无水乙醇（3.1）稀释至刻度，配成500mg/L的混合标准溶液。各取混合标准溶液适量，用无水乙醇（3.1）稀释，配成10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L、250mg/L、500mg/L共6个浓度的混合标准系列。标准系列应于使用前配制。
取各标准系列5μL注入高效液相色谱仪，分别采用3种流动相进行分析，记录各色谱峰面积，绘制校准曲线。32种禁限用染料成分在流动相1和流动相2中的保留时间参考附录B。
5.2.3 样品测定
在设定色谱条件下，取待测溶液5μL注入高效液相色谱仪，分别采用3种流动相体系进行分析。色谱图检出的物质，经与该物质对照品的保留时间和紫外光谱图比较确证后，根据峰面积，从校准曲线上查得相应组分的质量浓度。若待测溶液中染料成分的质量浓度超过了校准曲线线性范围的上限，需对待测溶液进行适当稀释。
注：实际操作过程中，可参考附录B中32种禁限用染料成分在流动相1和流动相2中的保留时间，并结合色谱分离情况和样品中染料成分的不同，对32种染料成分进行合理分组，使各染料成分获得完全分离。若染料成分间不能达到基线分离，可对色谱条件进行适当调整，如降低流速或降低有机相比例等。
8 7 结果计算
式中：w（染料成分）—— 染发类化妆品中染料成分的质量分数，%；
r—— 从校准曲线上查得的待测样液中染料成分的质量浓度，mg/L；
V—— 样品定容体积，mL；
D—— 稀释倍数（不稀释则取1）。
10 9 色谱图
1.p-苯二胺；2.p-氨基苯酚；3. 甲苯-2,5-二胺硫酸盐；4.m-氨基苯酚；5.o-苯二胺；6. 2-氯-p-苯二胺硫酸盐；7. o-氨基苯酚；8. 间苯二酚；9. 2-硝基-p-苯二胺；10. 甲苯-3,4-二胺；11. 4-氨基-2-羟基甲苯；12. 2-甲基雷琐辛；13. 6-氨基-m-甲酚；14. 苯基甲基吡唑啉酮；15. N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺HCl；16. 4-氨基-3-硝基苯酚
1.m-苯二胺；2. 2,4-二氨基苯氧基乙醇HCl；3. 氢醌；4. 4-氨基-m-甲酚；5. 2-氨基-3-羟基吡啶；6. N,N-双（2-羟乙基）-p-苯二胺硫酸盐；7.p-甲基氨基苯酚硫酸盐；8. 4-硝基-o-苯二胺；9. 2,6-二氨基吡啶；10. N,N-二乙基-p-苯二胺硫酸盐
1. N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺HCl；2. 苯基甲基吡唑啉酮；3. 6-羟基吲哚；4. 4-氯雷琐辛；5. 2,7-萘二酚；6.N-苯基-p-苯二胺；7. 1,5-萘二酚；8. 1-萘酚
12 附录A
序号 | INCI名 | 中文名称 | 纯度/% |
1 | p-Phenylenediamine | p-苯二胺 | ≥95 |
2 | p-Aminophenol | ≥97 | |
3 | Toluene-2,5-diamine sulfate | 甲苯-2,5-二胺硫酸盐 | ≥98 |
4 | m-Aminophenol | ≥98 | |
5 | o-Phenylenediamine | o-苯二胺 | ≥98 |
6 | 2-Chloro-p-phenylenediamine sulfate | 2-氯-p-苯二胺硫酸盐 | ≥97 |
7 | o-Aminophenol | ≥98 | |
8 | Resorcinol | ≥98 | |
9 | 2-Nitro-p-phenylenediamine | 2-硝基-p-苯二胺 | ≥95 |
10 | Toluene-3,4-diamine | 甲苯-3,4-二胺 | ≥97 |
11 | 4-Amino-2-hydroxytoluene | ≥98 | |
12 | 2-Methylresorcinol | 2-甲基雷琐辛 | ≥98 |
13 | 6-Amino-m-cresol | ≥98 | |
14 | Phenyl methyl pyrazolone | 苯基甲基吡唑啉酮 | ≥98 |
15 | N,n-Diethyltoluene-2,5-diamine HCl | N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺HCl | ≥97 |
16 | 4-Amino-3-nitrophenol | ≥98 | |
17 | m-Phenylenediamine | m-苯二胺 | ≥95 |
18 | 2,4-Diaminophenoxyethanol HCl | ≥95 | |
19 | Hydroquinone | ≥99 | |
20 | 4-Amino-m-cresol | ≥98 | |
21 | 2-amino-3-hydroxypyridine | ≥97 | |
22 | N,N-Bis（2-hydroxyethyl）-p- phenylenediamine sulfate | N,N-双（2-羟乙基）-p-苯二胺硫酸盐 | ≥97 |
23 | p-Methylaminophenol sulfate | ≥99 | |
24 | 4-Nitro-o-phenylenediamine | 4-硝基-o-苯二胺 | ≥98 |
25 | 2,6-diaminopyridine | ≥98 | |
26 | N,n-Diethyl-p-phenylenediamine sulfate | N,N-二乙基-p-苯二胺硫酸盐 | ≥99 |
27 | 6-Hydroxyindole | 6-羟基吲哚 | ≥98 |
28 | 4-Chlororesorcinol | 4-氯雷琐辛 | ≥98 |
29 | 2,7-Naphthalenediol | 2,7-萘二酚 | ≥98 |
30 | N-Phenyl-p-phenylenediamine | N-苯基-p-苯二胺 | ≥98 |
31 | 1,5-Naphthalenediol | 1,5-萘二酚 | ≥95 |
32 | 1-Naphthol | ≥99 |