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缓冲液
缓冲溶液作用原理和pH值当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时,有阻碍溶液pH变化的作用,称为缓冲作用,这样的溶液叫做缓冲溶液。当加入一定量强碱时,溶液中存在的弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH的变化。醋酸-醋酸钠缓冲液(pH6.0)取醋酸钠54.6g,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后,加水稀释至500ml,即得。
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血红蛋白电泳
概述:各种血红蛋白具有不同的等电点,在一定pH值的缓冲液中可带不同电荷。④丽春红染液:丽春红S染料1.8g三氯醋酸26.8g磺柳酸26.8g蒸馏水加至1000ml此为贮存液。③漂洗液:乙醇(或甲醇)45ml冰醋酸5ml蒸馏水50ml④浸出液NaOH0.4mol/L。蜡酸纤维薄膜电泳直接比色法:试剂:同醋酸纤维素膜微量血红蛋白电电泳。
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血清蛋白电泳
概述:蛋白质等生物分子在缓冲液中带负电荷或正电荷,在电场中向阳极或阴极运动,称为电泳(electmphomsis)。正常值:醋酸纤维素膜电泳法:白蛋白0.61~(4)点加样本时,一定要注意薄膜的毛面和光面,将样本点在毛面上。相关疾病:肝硬化、原发性肝癌、昏迷、脂肪肝、高脂血症、肾病综合征、糖尿病、黄疸、多发性骨髓瘤
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SPE
概述:蛋白质等生物分子在缓冲液中带负电荷或正电荷,在电场中向阳极或阴极运动,称为电泳(electmphomsis)。正常值:醋酸纤维素膜电泳法:白蛋白0.61~(4)点加样本时,一定要注意薄膜的毛面和光面,将样本点在毛面上。相关疾病:肝硬化、原发性肝癌、昏迷、脂肪肝、高脂血症、肾病综合征、糖尿病、黄疸、多发性骨髓瘤
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毛细管电泳
凝胶是一种固态的分散的体系。胶束电动斩学毛细管色谱(MicellarElectrokineticCapillaryChromatography,MECC)分离原理:是电泳技术和色谱技术的交叉,当把离子型表面活性剂加入缓冲液中,并且其浓度足够大时,这种表面活性剂的单体就结合在一起,形成球体(胶束)。疏水性强的作用力大,保留的时间长。
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WS/T 792—2021 日本血吸虫抗体检测标准 酶联免疫吸附试验法
5.3包被缓冲液:0.05mol/LpH9.6碳酸盐缓冲液,制备方法见附录A.2。6.2.2加受检和对照血清:用样品稀释液1:100比例稀释受检者、阴性对照和阳性对照血清,各取100μL稀释血清加入酶标反应板的小孔中,每板同时设置两孔阴性对照血清、一孔阳性对照血清和一孔样品稀释液空白对照,置恒温水浴箱内37℃孵育1h。[2]吴观陵.
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电泳法
电泳法,是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。(3)点样有湿点法和干点法。
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β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶
概述:β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)可水解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷,也能水解β-N-乙酰氨基半乳糖苷。其测定方法有比色法和荧光光度法。取已配好的上述缓冲液(枸橼酸30mmol/L,磷酸盐47.5mmol/L)50ml,加叠氮钠10mg,牛血清白蛋白50mg,溶解,4℃冰箱可稳定数周,混浊应弃去,此为含牛血清白蛋白的缓冲液。
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酶联免疫吸附剂测定
因此把亲和素和生物素与ELIS偶联起来,就可大提高ELISA的敏感度。有人认为此法为辣根过氧化物酶交联最有效的方法。(2)在一个横行各包被孔中加入强阳性抗原液,另一横行加入弱阳性抗原液,第三横行加入阴性对照液,保温,洗涤。洗涤如不彻底,特别在最后一次,如有酶结合物的非特异性吸附,将使空白值升高。
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ELISA
因此把亲和素和生物素与ELIS偶联起来,就可大提高ELISA的敏感度。有人认为此法为辣根过氧化物酶交联最有效的方法。(2)在一个横行各包被孔中加入强阳性抗原液,另一横行加入弱阳性抗原液,第三横行加入阴性对照液,保温,洗涤。洗涤如不彻底,特别在最后一次,如有酶结合物的非特异性吸附,将使空白值升高。
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WS/T 571—2017 裂头绦虫幼虫检测
基本信息:ICS11.020C62中华人民共和国卫生行业标准WS/T571—2017《裂头绦虫幼虫检测》(Detectionofdiphyllobothroidlarvae)由中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会2017年8月1日《关于发布〈钉螺调查〉等9项推荐性卫生行业标准的通告》(国卫通〔2017〕11号)发布,自2018年2月1日起实施。琼脂糖凝胶;
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t-PA
(3)抗原测定(t-PA∶Ag)ELISA法:本试验根据双抗体夹心法原理,即将纯化的t-PA单克隆抗体包被在固相载体上温育,然后加含有抗原的待测标本。后者可使邻苯二胺基质液呈棕色反应,其反应颜色深浅与标本中t-PA含量呈正比关系。④发色底物混合液:将纤溶酶原、发色底物和加速剂混合,立即100μl/孔加至酶标板各孔中。
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组织纤维溶酶原激活物
(3)抗原测定(t-PA∶Ag)ELISA法:本试验根据双抗体夹心法原理,即将纯化的t-PA单克隆抗体包被在固相载体上温育,然后加含有抗原的待测标本。后者可使邻苯二胺基质液呈棕色反应,其反应颜色深浅与标本中t-PA含量呈正比关系。④发色底物混合液:将纤溶酶原、发色底物和加速剂混合,立即100μl/孔加至酶标板各孔中。
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滴眼用利福平
鉴别:(1)取本品的细粉适量,加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含10mg的溶液,滤过,取续滤液,照利福平项下的鉴别(1)试验,显相同的结果。色谱条件与系统适用性试验:用辛基硅烷键合硅胶为填充剂:以甲醇-乙腈-0.075mol/L磷酸二氢钾溶液一1.0mol/L枸橼酸溶液(30:30:36:4)为流动相;
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麝香草酚浊度试验
概述:测定血浆蛋白的水平和分析其成分是肝脏疾病重要试验之一。(6)肝外疾病:血清胶体稳定性试验对肝病并不具有特异性,在其他可发生白蛋白减少、球蛋白(γ或β球蛋白)或类脂质增加的疾病如疟疾、结缔组织疾病、黑热病、亚急性细菌性心内膜炎、多发性骨髓瘤等疾患时,亦可呈阳性反应。
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血清麝香草酚浊度试验
概述:测定血浆蛋白的水平和分析其成分是肝脏疾病重要试验之一。(6)肝外疾病:血清胶体稳定性试验对肝病并不具有特异性,在其他可发生白蛋白减少、球蛋白(γ或β球蛋白)或类脂质增加的疾病如疟疾、结缔组织疾病、黑热病、亚急性细菌性心内膜炎、多发性骨髓瘤等疾患时,亦可呈阳性反应。
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血清乳酸脱氢酶
概述:乳酸脱氢酶(LDH或LD)是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一,可催化丙酮酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应,也可催化相关的α-酮酸。(2)连续监测法:①55mmol/L乳酸锂Tris缓冲液:称取乳酸锂5.28g,Tris6.68g,溶于800ml蒸馏水中,在37℃水浴箱中用1mol/LHCl调pH至8.9(约需46ml),加水至1000ml,冰箱保存。
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川贝母
取PCR反应液,置500ul离心管中,进行酶切反应,反应总体积为20ul,反应体系包括10×酶切缓冲液2ul,PCR反应液6ul,SmaI(10U/ul)0.5ul,无菌超纯水11.5ul,酶切反应在30℃水浴反应2小时。供试品凝胶电泳图谱中,在与对照药材凝胶电泳图谱相应的位上,在100 250bp应有两条DNA条带,空白对照无条带。
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聚合酶链式反应
参与PCR反应体系的因素及其作用:参与PCR反应的因素主要包括模板核酸、引物、TaqDNA聚合酶、缓冲液、Mg2+、三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)、反应温度与循环次数、PCR仪等。当用RNA作模板时,首先要进行反转录生成cDNA,然后再进行正常的PCR循环。因此不应错配。浓度太高,容易生成引物二聚体,或非特异性产物。
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PCR
参与PCR反应体系的因素及其作用:参与PCR反应的因素主要包括模板核酸、引物、TaqDNA聚合酶、缓冲液、Mg2+、三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)、反应温度与循环次数、PCR仪等。当用RNA作模板时,首先要进行反转录生成cDNA,然后再进行正常的PCR循环。因此不应错配。浓度太高,容易生成引物二聚体,或非特异性产物。
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聚合酶链反应
参与PCR反应体系的因素及其作用:参与PCR反应的因素主要包括模板核酸、引物、TaqDNA聚合酶、缓冲液、Mg2+、三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)、反应温度与循环次数、PCR仪等。当用RNA作模板时,首先要进行反转录生成cDNA,然后再进行正常的PCR循环。因此不应错配。浓度太高,容易生成引物二聚体,或非特异性产物。
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血清γ-谷氨酰转肽酶
概述:γ-谷氨酰转移酶(GGT)临床上常称为γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT),广泛存在于肾、前列腺、胰、肝、盲肠和脑等组织中,在肾脏、胰腺和肝脏中含量之比约为100∶8∶4。②底物缓冲液(pH7.8~双甘肽110mmol/L;故配制时应注意温度的影响,如试剂空白管吸光度>0.08,则应将L-γ-谷氨酰-α-萘胺重结晶,以除去游离α-萘胺。
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α2-纤溶酶抑制抗原
概述:α2纤溶酶抑制物主要由肝脏合成,一种单链糖蛋白,是体内特异的抑制活性的丝氨酸蛋白酶,有限时性抑制纤溶酶的作用和抑制纤溶酶原与纤维蛋白结合,防止纤维蛋白被抗纤溶酶水解的作用。(2)用稀释缓冲液稀释抗体-POD结合物。(6)用稀释之t-PA抗体包被ELISA反应板,每孔200μl,温育过夜,然后用洗涤液洗3次。
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溶血反应
第三次用缓冲液洗涤,弃上清,取压积红细胞用缓冲液配制SRBC悬液,使用浓度一般为2%~由于补体溶血试验及补体结合试验均是比较精密的试验,其结果与溶血素的效价有关,所以试验需要滴定溶血素效价;按表14-3的要求在各管中加入试剂和反应物,一起放37℃水浴箱中温育30min。疾病活动期补体活化过度,血清补体水平下降;
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乌司他丁溶液
标准品溶液的制备:取乌司他丁标准品,用0.2mol/L三乙醇胺缓冲液(pH7.8)(取三乙醇胺29.8g,加水900ml溶解,用4mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8,加水至1000ml)溶解并定量稀释制成每1ml中含50单位的溶液。蛋白质含量:取本品适量,精密称定,照蛋白质含量测定法(2010年版药典二部附录ⅦM第一法)测定,即得。
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胰岛素原
概述:人胰岛素原(proinsulin)是胰岛素的前体物质,由胰岛素和C肽组成,具有双重免疫活性,既可与胰岛素抗抗体结合,又可与C肽抗体结合。(4)0.25%氯胺T:氯胺T25mg溶于标记缓冲液10ml。研究证明,部分表现为高胰岛素血症的2型糖尿病患者其实为高胰岛素原血症,是因为胰岛β细胞功能障碍,胰岛素原分泌增多所致。
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泪液乳酸脱氢酶
试剂:(1)底物缓冲液(含0.3mol/L乳酸锂,pH8.8):取乳酸锂2.88g,二乙醇胺2.1g,加蒸馏水约80ml溶解,以1mol/LHCl调pH8.8,加水至100ml。98.1%以MDHm>20%为异常LDH/MDH:<69岁者3.96±0.7>70岁者4.55±0.51化验结果临床意义:在细菌性角膜溃疡和角结膜化学伤时,泪LDH和MDH活性下降。15min内完成,否则吸光度降低。
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脑脊液载脂蛋白
试剂:(1)包被缓冲液:0.02mol/L碳酸盐缓冲液pH9.5;(2)火箭免疫电泳法。(3)ELISA法。化验结果临床意义:脑脊液中载脂蛋白含量远低于血液水平,免疫组化试验证明大脑额叶的星形胶质细胞及某些神经元能合成ApoE,而CSF中的ApoA1与ApoCⅡ可能从血中渗入。但当患神经系统疾病时,可致血脑屏障功能受到损害。
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脑脊液蛋白电泳
概述:中枢神经系统发生病变时(如感染、炎症、肿瘤、外伤、出血、水肿等),脑脊液中的化学成分都可能发生变化,可通过测定脑脊液中的某些化学成分的变化,作为临床诊断、治疗疾病和预后观察的依据。带电荷越多泳动越快;便于扫描或洗脱定量。相关疾病:脊髓灰质炎、肌萎缩侧索硬化、麻痹性痴呆、痴呆、结节病
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FPA
概述:纤维蛋白肽A(fibrinopepide-A,FPA)是在凝血酶作用下,纤维蛋白原α(A)链的精-16和甘-17之间的肽链裂解,释放出由1~5000r/min离心15min,吸取上清液至另一试管,再如上法以皂土吸附处理1次。(4)从温育后的上述各管中分别吸取200μl加入已包被的FPA的反应板各孔中,置板于37℃保温2h,洗板5次,甩干。
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纤维蛋白肽A
概述:纤维蛋白肽A(fibrinopepide-A,FPA)是在凝血酶作用下,纤维蛋白原α(A)链的精-16和甘-17之间的肽链裂解,释放出由1~5000r/min离心15min,吸取上清液至另一试管,再如上法以皂土吸附处理1次。(4)从温育后的上述各管中分别吸取200μl加入已包被的FPA的反应板各孔中,置板于37℃保温2h,洗板5次,甩干。
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血清免疫球蛋白G
冷却后,取去上层玻璃及模板,即得平整均匀的抗体琼脂板。相关疾病:系统性红斑狼疮、红斑狼疮、类风湿性关节炎、硬皮病、干燥综合征、多发性骨髓瘤、肝硬化、麻风、传染性单核细胞增多症、疟疾、锥虫病、肉瘤、霍奇金病、过敏性紫癜、重链病、肾病综合征、恶性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病
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血清免疫球蛋白A
概述:IgA占血清免疫球蛋白总量10%~冷却后,取去上层玻璃及模板,即得平整均匀的抗体琼脂板。加入最适稀释度抗血清,每管2.5ml。相关疾病:多发性骨髓瘤、系统性红斑狼疮、红斑狼疮、结节病、类风湿性关节炎、肝硬化、湿疹、风疹、单纯疱疹、弓形体病、重链病、肾病综合征、慢性淋巴细胞白血病、霍奇金病
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血清免疫球蛋白M
加入最适稀释度抗血清,每管2.5ml。化验结果临床意义:(1)升高:巨球蛋白血症、系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、硬皮病、急、慢性病毒性肝炎、胆汁性肝硬化、隐匿性肝硬化、恶性肿瘤、传染性单核细胞增多症、梅毒、黑热病、锥虫病、伤寒、弓形体病、乙型脑炎、单核细胞性白血病、霍奇金病等。
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血清游离脂肪酸
(4)10mmol/LpH6.5辅酶A溶液。(12)1g/LNaN3溶液(13)酰基辅酶A氧化酶溶液:约120u/ml(用缓冲液Ⅰ配制)。化验结果临床意义:(1)升高:糖尿病、糖原累积病、甲状腺功能亢进症、褐色细胞瘤、肢端肥大症、巨人症、库欣综合征、重症肝损害、心肌梗死、妊娠后期、阻塞性黄疸、肝炎、肝硬化、血色病等。
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非脂化脂肪酸
(4)10mmol/LpH6.5辅酶A溶液。(12)1g/LNaN3溶液(13)酰基辅酶A氧化酶溶液:约120u/ml(用缓冲液Ⅰ配制)。化验结果临床意义:(1)升高:糖尿病、糖原累积病、甲状腺功能亢进症、褐色细胞瘤、肢端肥大症、巨人症、库欣综合征、重症肝损害、心肌梗死、妊娠后期、阻塞性黄疸、肝炎、肝硬化、血色病等。
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长碳链脂肪酸
长碳链脂肪酸的医学检查:检查名称:长碳链脂肪酸分类:血液生化检查脂类测定长碳链脂肪酸的测定原理:酶法测定血清游离脂肪酸分三步反应,反应式如下:(1)(2)(3)试剂:以Boehringermannheim游离脂肪酸测定试剂盒为例:(1)缓冲液Ⅰ:0.2mol/LpH7.5KH2PO4(用5mol/LKOH调pH)。(4)10mmol/LpH6.5辅酶A溶液。
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血清游离甘油
血清游离甘油医学检查:分类:血液生化检查脂类测定取材:血液原理:酶法测定血清游离脂肪酸分三步反应,反应式如下:(1)(2)(3)试剂:以Boehringermannheim游离甘油测定试剂盒为例:(1)缓冲液Ⅰ:0.2mol/LpH7.5KH2PO4(用5mol/LKOH调pH)。相关疾病:肥胖肝硬化甲状腺功能亢进慢性肾功能衰竭糖尿病
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GBZ/T 300.153—2017 工作场所空气有毒物质测定 第153部分:磷胺、内吸磷、甲基内吸磷和马拉硫磷
表2酶活力标准管管号项目0(A)12345马血清溶液/mL0.00.200.400.600.801.0缓冲液/mL1.00.80.60.40.20.0相当于每25mL纯马血清毫升数/mL0.00.61.21.82.43.0各管加入1mL水,置于37℃±0.5℃恒温水浴中预热10min;临用前,用甲醇溶液稀释成2.0μg/mL磷胺、内吸磷、甲基内吸磷或马拉硫磷标准溶液。
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血浆皮质醇
概述:皮质醇(cortisol)由肾上腺皮质束状带所分泌,在血液中以结合态和游离态两种形式存在。⑤加入分离剂后,按和血浆相同方法离心分离和测量。(2)皮质醇浓度下降的疾病有:原发性或继发性肾上腺皮质功能减退症、家族性糖皮质类固醇结合蛋白(CBG)缺陷症、Graves病、低蛋白血症、严重肝病或肾脏疾病等。
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血浆皮质类固醇
概述:皮质醇(cortisol)由肾上腺皮质束状带所分泌,在血液中以结合态和游离态两种形式存在。⑤加入分离剂后,按和血浆相同方法离心分离和测量。(2)皮质醇浓度下降的疾病有:原发性或继发性肾上腺皮质功能减退症、家族性糖皮质类固醇结合蛋白(CBG)缺陷症、Graves病、低蛋白血症、严重肝病或肾脏疾病等。
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羊水甲胎球蛋白
别名:羊水甲胎球蛋白羊水甲胎蛋白的医学检查:检查名称:羊水甲胎蛋白分类:体液和排泄物检查羊水检查取材:羊水羊水甲胎蛋白的测定原理:系竞争抑制反应,被检羊水或AFP标准与一定量的125I-AFP及一定量的AFP抗血清溶液加在一起,混匀后在37℃温育,而后加入聚乙二醇溶液,AFP与抗体的复合物则产生沉淀。②缓冲液在2~
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羊水甲胎蛋白
别名:羊水甲胎球蛋白羊水甲胎蛋白的医学检查:检查名称:羊水甲胎蛋白分类:体液和排泄物检查羊水检查取材:羊水羊水甲胎蛋白的测定原理:系竞争抑制反应,被检羊水或AFP标准与一定量的125I-AFP及一定量的AFP抗血清溶液加在一起,混匀后在37℃温育,而后加入聚乙二醇溶液,AFP与抗体的复合物则产生沉淀。②缓冲液在2~
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脑脊液环磷酸腺苷
别名:脑脊液环磷酸腺苷脑脊液环磷腺苷的医学检查:检查名称:脑脊液环磷腺苷分类:体液和排泄物检查脑脊液检查化验取材:脑脊液脑脊液环磷腺苷的测定原理:cAMP是一种小分子半抗原,其特异性抗体是以人工合成的2'-O-ScAMP-BSA结合物免疫动物所获得。置真空干燥内减压除去三乙胺。离心,取上清液放-20℃保存。
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尿环磷腺苷
概述:环腺苷酸作为肽类激素的第二信使,在激活蛋白激酶,使核糖体中蛋白质磷酸化,加速“翻译”过程和促进特异性蛋白质的合成等方面起着非常重要的作用。(7)将反应液滴加至联接抽气泵的微孔滤膜上抽滤,再加2ml冷缓冲液洗涤反应管,亦加至膜上抽滤。(2)降低:甲状腺功能减退、支气管哮喘、甲状旁腺功能减退。
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脑脊液环磷腺苷
别名:脑脊液环磷酸腺苷脑脊液环磷腺苷的医学检查:检查名称:脑脊液环磷腺苷分类:体液和排泄物检查脑脊液检查化验取材:脑脊液脑脊液环磷腺苷的测定原理:cAMP是一种小分子半抗原,其特异性抗体是以人工合成的2'-O-ScAMP-BSA结合物免疫动物所获得。置真空干燥内减压除去三乙胺。离心,取上清液放-20℃保存。
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胃泌素
测B的放射性,从标准剂量抑制曲线查出血清中的浓度。临用前每瓶加试验缓冲液1ml溶解。(3)慢性萎缩性胃炎:分A、B型。B型为非自身免疫性疾病,壁细胞抗体阴性,病变部位主要在胃窦部,幽门腺G细胞受损,胃泌素分泌减少。相关疾病:胃泌素瘤、腹泻、十二指肠溃疡、胃溃疡、幽门螺杆菌感染、慢性肾功能衰竭、高钙血症
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血清脂蛋白电泳
概述:脂蛋白电泳主要用于高脂蛋白血症分型,也有助于了解冠心病的血脂状态,更好地指导临床诊疗工作。(6)定量:①比色法:将漂洗的薄膜吸干,剪下各染色的蛋白区带入相应的试管中,在白蛋白管中加0.4mol/L氢氧化钠6ml(计算时吸光度乘以2),其余各管加3ml,振摇数次,置37℃水箱20min使其色泽浸出。
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血清脂蛋白和血清脂蛋白电泳
概述:脂蛋白电泳主要用于高脂蛋白血症分型,也有助于了解冠心病的血脂状态,更好地指导临床诊疗工作。(6)定量:①比色法:将漂洗的薄膜吸干,剪下各染色的蛋白区带入相应的试管中,在白蛋白管中加0.4mol/L氢氧化钠6ml(计算时吸光度乘以2),其余各管加3ml,振摇数次,置37℃水箱20min使其色泽浸出。
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血清脂蛋白-α
概述:脂蛋白α在肝脏合成,是由载脂蛋白A和载脂蛋白B通过二硫键组成的特殊脂蛋白,成分类似低密度脂蛋白。所制备的McAb应与apoB及纤溶酶原(PMG)无交叉反应。(2)洗板及封闭:包被后的小孔用洗涤液洗3次,每次5min。(2)升高:见于动脉粥样硬化、脑梗死、脑动脉硬化、急性心肌梗死、急性风湿性关节炎、外科手术等。