稀释度

破伤风抗毒素效价测定法

小白鼠试验法试剂1.1标准抗毒素由中国药品生物制品检定所按期分发，所标单位应与国际单位等值。亦可用干燥毒素制成液体甘油毒素，即干燥毒素生理盐水溶解液与中性甘油（经116℃10分钟高压蒸汽灭菌）等量混合，每ml至少含20个试验量。120小时之内全部死亡，待检抗毒素之效价应以与对照小白鼠同时死亡的最高稀释度判定之。

白喉抗毒素效价测定法

家兔皮肤试验法试剂1.1标准抗毒素由中国药品生物制品检定所按期分发，所标单位应与国际单位等值。亦可自备，但应选经保存一年以上，毒力适宜的毒素。1.3稀释液硼酸盐缓冲盐水，灭菌后pH值应为7.0～但1支吸管只得用于1份样品）。待检抗毒素之效价应以与多数对照的反应强度相同之最高稀释度判定之，但反应强度不得超过对照。

冻干人凝血因子Ⅷ浓制剂

1∶256）2.3测定2.3.1第一步，混合物的保温取7支玻璃凝集管放入冰浴中，每管加0.3ml混合试剂，然后于第1、2、3管分别加高、中、低稀释度的标准品各0.1ml，第4、5、6管分别加高、中、低稀释度的样品各0.1ml，第7管加枸橼酸盐-氯化钠溶液0.1ml（作空白）；用法本品专供静脉输注，应在临床医师的严格监督下使用。

气性坏疽抗毒素效价测定法

小白鼠试验法试剂1.1标准抗毒素气性坏疽（威氏、水肿、脓毒、溶组织）标准抗毒素由中国药品生物制品检定所按期分发，所标单位应与国际单位等值，标准抗毒素应保存于2～毒素应保存于2～4.4.2待检抗毒素试验组吸取不同稀释度之待检抗毒素各1.0ml分别装入小试管中，每管补加稀释液0.5ml（可在抗毒素之前加入）。

肉毒抗毒素效价测定法

小白鼠试验法试剂1.1标准抗毒素由中国药品生物制品检定所按期分发，所标单位应与国际单位等值。亦可自备，但其制法（包括菌种、培养基、培养条件及干燥方法等）应与检定所分发者相同。4.4.2待检抗毒素试验组吸取不同稀释度之待检抗毒素各1.0ml分别装入小试管中，每管补加稀释液0.5ml（可在抗毒素之前加入）。

吸附精制白喉类毒素

类别生物制品。3.3脱毒试验每瓶类毒素或精制类毒素取样，用灭菌生理盐水分别稀释至100Lf/ml，用体重2.0kg左右的家兔2只，每只动物分别皮内注射上述稀释样品各0.1ml及25倍稀释的锡克毒素0.1ml,于96小时判定结果。14g小白鼠8只，皮下注射0.5ml，免疫5周后，每个小白鼠采血，分离血清，56℃30分钟灭活，放-20℃保存。

GB/T 33417—2016 过氧化氢气体灭菌生物指示物检验方法

基本信息：ICS11.080C50中华人民共和国国家标准GB/T33417—2016《过氧化氢气体灭菌生物指示物检验方法》（Testmethodofbiologicalindicatorforhydrogenperoxidevapoursterilizationprocesses）由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会于2016年12月30日发布，自2017年07月01日起实施。

GB/T 33420—2016 压力蒸汽灭菌生物指示物检验方法

基本信息：ICS11.080C50中华人民共和国国家标准GB/T33420—2016《压力蒸汽灭菌生物指示物检验方法》（Evaluationstandardofbiologicalformoistheatsterilizationprocesses）由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会于2016年12月30日发布，自2017年07月01日起实施。A.8培养至72h，计数菌落数。

精制抗蛇毒血清

精制抗蛇毒血清制造及检定规程本品系蛇毒或脱毒蛇毒免疫马的血浆，经胃酶消化后用硫酸铵盐析法制成的抗蛇毒球蛋白制剂，能中和相应蛇毒，用于治疗被相应毒蛇咬伤之患者。待检抗蛇毒血清之效价应以与对照①小白鼠同时死亡之最高稀释度判定。用法1.注射途径：通常采用静脉注射，也可做肌内或皮下注射。

吸附精制破伤风类毒素

类别生物制品。2.2脱毒试验每瓶取样，用体重300～WHO推荐的破伤风类毒素效价测定方法（毒素攻击法）免疫及攻击用生理盐水将吸附破伤风类毒素标准品和待检样品以2倍稀释法稀释成3～对照组健康小白鼠注射25倍稀释的上述毒素（对照组豚鼠注射100倍稀释的上述毒素），每只皮下注射0.5ml，攻击后观察5日，每日记录结果。

血清补体C3

抗C3血清用缓冲液稀释后放56℃水浴预温。一般以沉淀环直径在4～②在琼脂糖胶板距边缘2cm处打一排孔，孔径3mm，孔距2mm。在此基础上，再用参考标准物稀释各种浓度作为抗原进行测定，以选择出最适血清标本稀释度，即选出其测定结果基本上与参考标准物含量一致的稀释度，作为血清标本的最适稀释度。

免疫抑制酸性蛋白

若事先用标准抗原绘制成标准曲线，则待检标本中抗原含量，通过测量沉淀环大小，即可从标准曲线中求出。（2）20g/L琼脂：称取20g优质琼脂粉置于1000ml三角瓶中，加蒸馏水500ml，水浴煮沸溶解，然后再加上述热pH8.6巴比妥缓冲液500ml，加0.1gNaN3防腐，混匀后根据制板要求分装小试管备用。

WS/T 651—2019 医用低温蒸汽甲醛灭菌指示物评价要求

每批次/批号的生物指示物或染菌载体都应标注相应的D值。B.3选择适宜稀释度菌悬液，吸取其中混合均匀的悬液1.0mL加于无菌平皿内。C.5.2KT值验证D值将50个试验样本放入C.1规定的暴露条件下，暴露时间设定为计算出的KT值，暴露完成后，将样本取出接种含中和剂的增菌液，按生产商规定的温度和时间进行培养后观察结果。

旧结核菌素

2.7.2无菌试验按《生物制品无菌试验规程》进行。2.7.4效价测定标准旧结核菌素由中国药品生物制品检定所发给。600g已致敏的白色豚鼠最少4只，去毛后于背部脊柱两侧相对部位分别皮内注射上述稀释度的旧结核菌素各0.1ml（从尾侧起先注射稀释度高者）。用法用生理盐水稀释成10单位、100单位、1000单位3种稀释液。

溶血反应

第三次用缓冲液洗涤，弃上清，取压积红细胞用缓冲液配制SRBC悬液，使用浓度一般为2％～由于补体溶血试验及补体结合试验均是比较精密的试验，其结果与溶血素的效价有关，所以试验需要滴定溶血素效价；按表14-3的要求在各管中加入试剂和反应物，一起放37℃水浴箱中温育30min。疾病活动期补体活化过度，血清补体水平下降；

酶联免疫吸附剂测定

因此把亲和素和生物素与ELIS偶联起来，就可大提高ELISA的敏感度。有人认为此法为辣根过氧化物酶交联最有效的方法。（2）在一个横行各包被孔中加入强阳性抗原液，另一横行加入弱阳性抗原液，第三横行加入阴性对照液，保温，洗涤。洗涤如不彻底，特别在最后一次，如有酶结合物的非特异性吸附，将使空白值升高。

ELISA

因此把亲和素和生物素与ELIS偶联起来，就可大提高ELISA的敏感度。有人认为此法为辣根过氧化物酶交联最有效的方法。（2）在一个横行各包被孔中加入强阳性抗原液，另一横行加入弱阳性抗原液，第三横行加入阴性对照液，保温，洗涤。洗涤如不彻底，特别在最后一次，如有酶结合物的非特异性吸附，将使空白值升高。

血清白细胞介素3

概述：白细胞介素3（IL-3），为多克隆刺激因子，调节造血功能，由丝裂原或抗原刺激激活的T细胞及一些细胞株产生，其主要功能为调节多能干细胞的生长及分化，使之产生各系骨髓细胞。（3）IL-3标准品经透析的重组IL-3（10ng），保存于蛋白保存缓冲液中。（9）显色剂B：12.5ml稳定的色原（四甲基联苯胺盐）。11.酶标板盖。

Wassermann补体结合试验

密螺旋体属中的其他种包括品他密螺旋体（亦称斑点病密螺旋体）、奋森密螺旋体等十几种。试剂：（1）特异性抗原。溶血素单位：即能完全溶解红细胞的溶血素最高稀释度，按表1假定结果，1∶2400稀释度（0.1ml）的溶血素为1个单位。按表2成分、次序、剂量加入各管中作滴定，整个试验过程中补体应放在冰水盒中，防止活性下降。

华氏补体结合试验

密螺旋体属中的其他种包括品他密螺旋体（亦称斑点病密螺旋体）、奋森密螺旋体等十几种。试剂：（1）特异性抗原。溶血素单位：即能完全溶解红细胞的溶血素最高稀释度，按表1假定结果，1∶2400稀释度（0.1ml）的溶血素为1个单位。按表2成分、次序、剂量加入各管中作滴定，整个试验过程中补体应放在冰水盒中，防止活性下降。

梅毒血清补体结合试验

密螺旋体属中的其他种包括品他密螺旋体（亦称斑点病密螺旋体）、奋森密螺旋体等十几种。试剂：（1）特异性抗原。溶血素单位：即能完全溶解红细胞的溶血素最高稀释度，按表1假定结果，1∶2400稀释度（0.1ml）的溶血素为1个单位。按表2成分、次序、剂量加入各管中作滴定，整个试验过程中补体应放在冰水盒中，防止活性下降。

钩端螺旋体病补体结合试验

别名：钩端螺旋体补体结合试验检查名称：钩端螺旋体病补体结合试验分类：血清学检查补体结合试验钩端螺旋体病补体结合试验的原理：钩端螺旋体抗原与相应特异性抗体结合后，再加荧光素标记的抗人球蛋白抗体，在荧光显微镜下发出荧光。（2）将各稀释度的受检血清分别滴加在抗原涂片的各点上，每张涂片可滴4份受检血清。

凝血因子活性测定(因子Ⅷ∶C、Ⅸ∶C)

概述：凝血因子Ⅶ是一个大分子复合物，由血管性血友病因子（VWF）和因子Ⅷ凝血活性（Ⅷ∶C）两部分组成。将各稀释度的样品分别与缺乏因子Ⅷ∶C或Ⅸ∶C的基质血浆、脑磷脂悬液及5g/L白陶土生理盐水悬液各0.1ml，混匀置37℃预温2min整，加0.05mol/L氯化钙溶液0.1ml，记录凝固时间。因子Ⅸ∶C68%～

血清补体C3裂解产物

别名：serumC3SP血清补体C3裂解产物的医学检查：检查名称：血清补体C3裂解产物分类：免疫学检查细胞免疫测定取材：血液血清补体C3裂解产物的测定原理：将含有抗补体抗体的琼脂铺在玻璃板上，然后打孔，加抗原（补体）。然后再加等量的、已预温的15.0g/L琼脂，使抗血清的最终稀释度达到要求。一般以沉淀环直径在4～

微生态活菌制品总论

（2）非致病性杂菌计数称取供试品1g，加到9m10.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜稀释液中，混匀，做10倍系列稀释，取适宜稀释度供试品溶液0.1ml加到已备好的琼脂培养基上，以玻棒涂匀，一式3份，倒置，恒温培养箱中培养48小时，每天观察结果，记录平皿上生长的菌落数。

血清白细胞介素6

概述：IL-6是一26KD的多肽，生物效应极为广泛，主要包括：①调节B细胞的生长和分化。据此描绘出标准品和待测标本各稀释度的概率单位曲线。（2）IL-6免疫学检测①抗人IL-6单克隆抗体（aBSF2-166），用包被缓冲液稀释成0.1μg/ml，加入96孔酶标板，100μ1/孔，4℃过夜。正常值：（1）ELISA（酶联免疫吸附试验）：0.373～

血型物质检测

操作名称血型物质检测用品及准备5％A、B、O和Le(a+b-)红细胞悬液，与待检者相同，标化的抗A、抗B、抗H、抗Lea血清，已知的分泌型和非分泌型唾液，其A、B、O型与待检者相同。②以3000r/min离心10min，留取上清液备用，弃去不透明的半固态物质。对Lewis试验分别标明待检者、Lewis阳性、Lewis阴性和生理盐水。

腮腺炎病毒抗体

概述：腮腺炎病毒（mumpsvirus）属副粘病毒科，结构类似于副流感病毒。如实验时应用2个单位，即1∶1200稀释度（0.1ml）的溶血素溶液。按表2成分、次序、剂量加入各管中作滴定，整个试验过程中补体应放在冰水盒中，防止活性下降。化验结果临床意义：阳性：流行性腮腺炎，并发脑膜炎、睾丸炎、胰腺炎、卵巢炎等。

冻干人凝血酶原复合物

冻干人凝血酶原复合物制造及检定规程本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆或血清，经低温乙醇法或卫生部批准的其他适宜方法提制而得的冻干制剂，并经病毒灭活处理。2.10.2小白鼠试验用体重18～阴性对照：0.2ml生理盐水加入0.5%(g/ml)纤维蛋白原溶液0.2ml，在37℃放置4小时，不得有任何凝块纤维蛋白出现。

CAT

此外布鲁菌尚有一种表面抗原，可与土拉热（野兔热）、霍乱、结肠炎耶氏菌病患者的血清发生交叉凝集，因此凝集反应的价值，不如肥达试验可靠。别名：半胱胺酸试验,CAT检查名称：半胱氨酸试验分类：血清学检查凝集试验化验取材：血液半胱氨酸试验的原理：将定量的菌液与不同稀释度的病人血清混合，装入管内混匀。

半胱氨酸试验

此外布鲁菌尚有一种表面抗原，可与土拉热（野兔热）、霍乱、结肠炎耶氏菌病患者的血清发生交叉凝集，因此凝集反应的价值，不如肥达试验可靠。别名：半胱胺酸试验,CAT检查名称：半胱氨酸试验分类：血清学检查凝集试验化验取材：血液半胱氨酸试验的原理：将定量的菌液与不同稀释度的病人血清混合，装入管内混匀。

试管凝集试验

常用已知一定量的抗原（细菌、细胞等）与一系列受稀释的病人血清混合，在保温放置后观察结果，以判定受检血清有无相应抗体及其效价。检查名称：试管凝集试验分类：血清学检查凝集试验取材：血液试管凝集试验的原理：将定量的菌液与不同稀释度的病人血清混合，装入管内混匀。观察结果前切勿摇动试管，以免凝集块分散。

抗体效价测定

操作名称抗体效价测定方法及内容1．取小试管10支，分别标明1-10号，各管加生理盐水0.2ml，用刻度吸管吸取被检者血清0.2ml加入到第1管充分混匀，再用同一吸管从第1试管中吸出0.2ml加入到第2管，充分混匀后再吸取0.2ml加入第3管，以此倍量稀释。出现凝集的最高稀释度的倒数为效价。例如下表抗A血清效价测定结果为256。

生物制品无菌试验规程

检查不含汞类防腐剂制品中的需氧性和厌氧性杂菌时，该培养基中可不加硫乙醇酸盐。10-9）菌液各1ml分别接种到9ml（用于厌氧菌的培养基在试管中装置高度不得低于7cm）试验用培养基中，每个稀释度至少接种3管，并用未接种的培养基做对照，将接种乙型溶血性链球菌、生子孢梭状芽胞杆菌的培养基，置30～

抗溶血性链球菌“O”试验

概述：抗链球菌溶血素“O”试验，简称抗“O”，是机体产生的以链球菌溶血素O为抗原的抗体。（3）红细胞悬液：取枸橼酸钠抗凝的兔或O型人血，用ASO缓冲液洗涤3次，最后1次洗涤后，必须经2000r/min离心10～②少数非溶血性链球菌感染：病毒性肝炎、肾病综合征、结核病、结缔组织病、亚急性感染性心内膜炎、多发性骨髓瘤等。

抗链球菌溶血素O试验

概述：抗链球菌溶血素“O”试验，简称抗“O”，是机体产生的以链球菌溶血素O为抗原的抗体。（3）红细胞悬液：取枸橼酸钠抗凝的兔或O型人血，用ASO缓冲液洗涤3次，最后1次洗涤后，必须经2000r/min离心10～②少数非溶血性链球菌感染：病毒性肝炎、肾病综合征、结核病、结缔组织病、亚急性感染性心内膜炎、多发性骨髓瘤等。

抗链O

概述：抗链球菌溶血素“O”试验，简称抗“O”，是机体产生的以链球菌溶血素O为抗原的抗体。（3）红细胞悬液：取枸橼酸钠抗凝的兔或O型人血，用ASO缓冲液洗涤3次，最后1次洗涤后，必须经2000r/min离心10～②少数非溶血性链球菌感染：病毒性肝炎、肾病综合征、结核病、结缔组织病、亚急性感染性心内膜炎、多发性骨髓瘤等。

肥达反应

概述：伤寒、副伤寒患者发病12天后血清中可产生特异性抗体，并逐渐上升，至第4周达高峰，以后逐渐下降。曾注身接种伤寒疫苗者。曾患过伤寒病者。附注：（1）少数伤寒患者整个病程“O”抗原可呈阴性反应，尤其是营养不良和抗体免疫功能缺陷者，以及免疫功能尚未完善的幼儿，或者早期已使用大量抗生素的病人可出现假阴性。

唾液富组蛋白

亦可将无溶血、无乳糜的正常人混合标本样测出有关成份的含量后，略作调正，使与校正卡上含量一致，然后过滤分装，低温保存。（5）抗血清：可用国内特异性好，亲和力强，效价高的抗血清，选择最适稀释度，用0.45μm微孔滤膜过滤。现以免疫球蛋白G（IgG）为例。20mg/L之间，最适抗原中点浓度为2mg/L（指反应管中的终浓度）。

唾液白蛋白

（5）抗血清：可用国内特异性好，亲和力强，效价高的抗血清，选择最适稀释度，用0.45μm微孔滤膜过滤。以已知含量参考血清作为标准抗原，用ICS手动或自动方式测出该成分的含量，使与校正卡上所列含量一致，然后分装4℃保存。④标本测定：所有体液皆可测定，一般血清标本可按反应管中最佳检测浓度稀释。

2010年版药典三部附录Ⅹ

在96孔细胞培养板中，做2倍系列稀释，共8个稀释度，每个稀释度做2孔，每孔分别留50μl标准品溶液，弃去孔中多余溶液。试验前取适量羊红细胞用生理氯化钠溶液洗3次，用20%胎牛血清Hank's液配成1%羊红细胞悬液。结果判定：阳性对照组的死亡淋巴细胞率大于20%，且阴性对照组的死亡淋巴细胞率小于10%，试验成立。

2010年版药典三部附录Ⅺ

《中华人民共和国药典》（2010年版）三部附录Ⅺ附录ⅪA人用狂犬病疫苗效价测定法（NIH法）：本法系将供试品免疫小鼠后，产生相应的抗体，通过小鼠抗体水平的变化测定供试品的免疫原性。19g小鼠腹部或大腿根都皮下注射0.4ml，应注意勿使注射液流出，标准品及供试品的每个稀释度各注射小鼠至少3只。

精制抗狂犬病血清

类别生物制品。3.4采血指标血清效价在100IU/ml以上。12g小白鼠30只，分成5组，每组6只，用经37℃作用的10-7至10-3病毒悬液接种小白鼠，每个稀释度接种小白鼠6只，每只小白鼠脑内接种0.03ml，观察14天，每天观察小白鼠发病死亡情况。先在受伤部位进行浸润注射，余下的血清进行肌内注射（头部咬伤可注射于颈背部肌内）。

吸附百白破联合疫苗

吸附百白破联合疫苗药典标准：品名：中文名：吸附百白破联合疫苗汉语拼音：XifuBaiBaiPoLianheYimiao英文名：Diphtheria,TetanusandPertussisCombinedVaccine，Adsorbed定义、组成及用途：本品系由百日咳疫苗原液、白喉类毒素原液及破伤风类毒素原液加入氢氧化铝佐剂制成。2.2.3半成品检定：按3.1项进行。同时饲养小鼠55～

冻干乙型脑炎灭活疫苗（Vero细胞）

10-9稀释度病毒液脑内接种体重为7～2.4半成品：2.4.1配制：将原液按规定的同一蛋白质含量或抗原含量进行稀释，且总蛋白质含量应不超过20μg/ml，加入适宜的稳定剂即为半成品。3.2.2病毒灭活验证试验：取灭活后病毒液脑内接种体重12～3.4.5效价测定：采用免疫小鼠中和抗体测定法，以蚀斑减少中和试验测定中和抗体。

GB/T 33419—2016 环氧乙烷灭菌生物指示物检验方法

基本信息：ICS11.080C50中华人民共和国国家标准GB/T33419—2016《环氧乙烷灭菌生物指示物检验方法》（Testmethodofbiologicalindicatorforethyleneoxidesterilizationprocesses）由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会于2016年12月30日发布，自2017年07月01日起实施。3个不同稀释度。

补体结合试验

在最初阶段对消耗补体建立起足够的抗原抗体反应时，没有发生致敏红细胞的溶血，但补体剩余下来则引起溶血反应。②采取方阵排列试管，纵行各管加不同浓度的补体0.1ml，横排各管加溶血素0.1ml（皆应从最高稀释度加起）混匀后，各管加BBS0.2ml，补体和溶血素对照管各加BBS0.3ml，最后在各管中加2%羊红细胞0.1ml。②特异性强。

类A血型物质测定法

血凝抑制法试剂1.1抗A血型血清1.2A血型物质：制备一标准溶液，含量1mg/ml，由中国药品生物制品检定所分发或经其认可。方法2.1抗A血型血清试验剂量的测定准备一组10支9mm直径试管，将抗A血型血清用生理盐水进行2倍系列稀释，体积为0.1ml，由1/2稀释度开始，加1%A型人红细胞0.1ml。

伤寒菌苗

伤寒菌苗制造及检定规程本品系用伤寒菌培育后取菌苔制成悬液，加甲醛杀菌，以磷酸盐缓冲生理盐水稀释成每ml含菌3亿制成。2.4原液检定2.4.1镜检菌形应正常，无杂菌。20g之健康小白鼠2只，每只皮下注射菌苗0.5ml，用苯酚作防腐剂的菌苗注射之小白鼠会发生战栗症状，但不应超过半小时，观察7日，不得有局部脓肿或死亡。

伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗

20小时的培养物以磷酸盐缓冲生理盐水稀释成含菌6亿/ml，与相应的伤寒、副伤寒甲、乙菌诊断血清做定量凝集试验，摇匀后放37℃过夜，以肉眼可见到凝集（+）之血清最高稀释度为凝集反应之效价，凝集价不应低于血清原效价之半。16g小白鼠至少30只，每只皮下注射上述浓度的菌液0.5ml。2.4原液检定2.4.1镜检菌形应正常，无杂菌。