3 概述
人體內與凝血系統功能相拮抗的是抗凝血系統,在正常情況下,兩者保持動態平衡,從而維持血液在血管內的正常流動。抗凝血酶Ⅲ是抗凝系統中最重要的成分,它由肝臟合成,爲一種多功能的絲氨酸蛋白酶抑制物,可抑制凝血酶生成,具有強大的抗凝活性.佔血漿抗凝酶活性的70%。
4 抗凝血酶-Ⅲ的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 化驗取材
4.4 抗凝血酶-Ⅲ的測定原理
在含有抗AT-Ⅲ抗血清(抗體)的瓊脂糖凝膠板孔中,加入受檢血漿或血清(抗原),進行電泳,抗原和抗體會形成特異地火箭樣免疫沉澱峯。沉澱峯的高度與樣品中AT-Ⅲ的抗原量成正比關係。
4.5 試劑
(1)兔抗人AT-Ⅲ血清。
(2)巴比妥-鹽酸緩衝液(pH值8.2):巴比妥鈉47.6g,溶於3L水中,加1.17mol/L鹽酸(濃鹽酸193ml加水1807ml)55ml,測pH值,並以鹽酸校正pH值至8.2,然後用水補足總量至4265ml。
(3)標準血漿。
(4)4.4mmol/L磷鉬酸溶液。
4.6 操作方法
(1)將溶解後的兔抗人AT-Ⅲ血清(試劑A)按瓶籤標示稀釋倍數的一半,用電泳緩衝液稀釋備用。另用水配成20g/L濃度的瓊脂糖溶液。將上述兩種溶液在56℃等量混勻,傾入夾有80mm×80mm×1.5mm“U”形模框的兩塊玻板中,待凝固後,於板之一側打一排加樣孔,孔徑2mm,孔距3mm。
(2)將溶解後的標準血漿(試劑B)用水作1∶2、1∶4、1∶8、1∶16的稀釋,樣品也用水作1∶5稀釋,然後用微量加樣器分別定量加入加樣孔,每孔5μl,於15V/cm電勢梯度下,電泳6h(加樣孔應置於負極側)。
(3)電泳完畢,將凝膠板置4.4mmol/L磷鉬酸溶液中,固定15min,量取各火箭峯,自加樣中心至峯尖的高度(mm)。以不同稀釋度標準血漿的峯高(X)對相應的AT-Ⅲ抗原含量(Y)在正座標紙上製作標準曲線。再將樣品的峯高在標準曲線上直接讀出AT-Ⅲ抗原含量;亦可作直線迴歸運算,得迴歸公式Y=bx+a,將樣品的峯高代入式中x,即得出ATⅡ∶Ag的含量Y。
4.7 正常值
260~320mg/L。
4.8 化驗結果臨牀意義
(1)AT-Ⅲ缺乏或減少:見於:①先天性AT-Ⅲ缺陷,按AT-Ⅲ∶Ag和AT-Ⅲ∶a測定結果分爲交叉反應物質陰性型(即AT-Ⅲ∶Ag與AT-Ⅲ∶a均減低)及交叉反應物質陽性型(即AT-Ⅲ∶Ag正常而AT-Ⅲ∶a減低),②獲得性AT-Ⅲ缺乏,見於嚴重肝臟疾病、DIC、外科手術後、血栓前狀態和血栓性疾病等(如腎小球疾病、惡性腫瘤、心腦血管病)。
(2)AT-Ⅲ增高:見於血友病,口服抗凝劑和應用黃體酮等藥物。再生障礙性貧血,心瓣膜病,尿毒症,腎移植。
4.9 附註
(1)樣品採用0.109mol/L枸櫞酸鈉抗凝,而不用肝素抗凝。
(2)樣品不可反覆凍融。